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Nico111

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Tout ce qui a été posté par Nico111

  1. Non "Le vih est un virus infectieux qui peut être exogène, entité à part entière, pas pour la dissidence, mais pour nous oui." Oui
  2. Mouais OK, laisse tomber, je vais faire une petite pause, ça me fatigue.
  3. Avant tout, je ne parle que du VIH défini par l'orthodoxie, il est caractérisé puisqu'on en fait un vecteur d'expression de gène autre donc on enlève certains de ces gène , on les remplace, on transfecte ce plasmide dans des cellules et on obtient des virus qui ensuite seront administrés à des cellules ou organisme pour exprimer la protéine que l'on veut. Donc oui c'est du VIH tel que l'entend l'orthodoxie, infectieux, exogène et on connait chacun des ses nucléotides. Pas uniquement, tu peut faire exprimer par ce vecteur une protéine dite GFP qui est verte au UV, tu peux donc obtenir une souris verte après infection et passage au UV (c'est immonde je sais) par exemple. Ensuite bien sur que les tecniques sont spécifiques mais encore une fois il faut savoir si ce que tu cherches est bien ce que tu crois. J'adore d'ailleurs le "on", on croirait que le monde entier pense comme toi ! Lol , c'est de la thérapie, je n evois pas l'intérêt d'apporter une protéine si elle est déjà synthétisée normalement par l'organisme !
  4. Moi je ne connais que ce VIH, apparement sequencé des virus intégrés dans l'ADN de lymphocyte T infectée. Ca marche, ça donne des virus infectieux manipulables modifiables etc....mais si ça ne correspond pas à l'agent qui potentiellement serait crée lors du SIDA après stress oxydatif et bien alors il faut lui donner un autre nom ! Que veux tu que je te dises de plus. En tant qu'entité appelé VIH par l'orthodoxie, c'est un virus qui peut sortir des cellules et infecter d'autres cellules et faire exprimer ce que tu veux, c'est tout. Le VIH de l'orthodoxie si, pas celui que tu considères ou qui n'existe peut être pas dans la pathologie SIDA. Effectivement alors, pour la suite isolation, etc......ça ne peut pas correspondre ! mélangé à des vésicules tu veux dire non ? dans la publi de 2006, c'est plutût pur, hustement leur technique de production permet d'éviter cela apparement. Je te dirais que je n'ai jamais vu une seule publi qui montre les images des cultures de contrôle pour la microscopie, ce n'est jamais montré. Ils ont 120 nm +/- 14 ça correspond pas mal aux rétro qui sont aux environ de 100. Il me semble qu'ils sont parti d'ADN sous forme de plamsides pour faire les stock don cje ne vois pas comment il n'y aurait pas la gp120. Tu veux des références, je t'en donne ! De toute façon, j'ai déjà utilisé un vecteur lentiviral à base HIV pour exprimer une protéine, je n'ai donc pas de doute sur l'infectiosité et la multiplication de ces vecteurs basés sur HIV ! de toute façon, pour ce qui est du domaine de transfert de gène avec des vecteurs lentiviraux, on en a rien à faire du contrôle de culture, ta protéine exogène est exprimée ou non, le reste on s'en fout ! effectivement, au moins une semaine !
  5. Désolé, c'est vraiment pas beaucoup mais bon je ne vais pas passer 1 heure sur pubmed pour ça........ Bartosch B, Cosset FL. Related Articles, Links Abstract Strategies for retargeted gene delivery using vectors derived from lentiviruses. Curr Gene Ther. 2004 Dec;4(4):427-43. Review. Nightingale SJ, Hollis RP, Pepper KA, Petersen D, Yu XJ, Yang C, Bahner I, Kohn DB. Related Articles, Links Abstract Transient Gene Expression by Nonintegrating Lentiviral Vectors. Mol Ther. 2006 Mar 21; Torashima T, Okoyama S, Nishizaki T, Hirai H. Related Articles, Links Abstract In vivo transduction of murine cerebellar Purkinje cells by HIV-derived lentiviral vectors. Brain Res. 2006 Apr 12;1082(1):11-22. Epub 2006 Mar 6. Cockrell AS, Ma H, Fu K, McCown TJ, Kafri T. Related Articles, Links Abstract A trans-lentiviral packaging cell line for high-titer conditional self-inactivating HIV-1 vectors. Mol Ther. 2006 Mar 1; [Epub ahead of print] Yilmaz A, Fernandez S, Lairmore MD, Boris-Lawrie K. 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  6. Le VIH est il infectieux ? : oui puisqu'on peut infecter des cellules avec un VIH modifié qui contient à la place d'un de ses gènes une protéine autre et la faire exprimer dans ces cellules. C'est d'ailleurs les vecteurs rétrovirus qui sont à la base de pas mal de test de thérapie génique (dont les essais de Fisher il me semble). C'est également une particule qui peut sortir de la cellules puisqu'il se multiplie et qu'il est retrouvé dans le milieu de culture. Bien sur, ça n'empêche pas qu'il ne soit pas responsable du SIDA !
  7. Nico111

    Oxyde nitrique

    Va donc demander aux asthmatiques s'ils aiment la ventoline lors de crises ou les corticoides quand plus rien d'autres n'est assez efficaces !
  8. POur ceux que ça motive un article très intéressant où ils font de la microscopie éléctronique" directement " avec des echantillons de patients : trachée pour grippe, urine pour CMV etc.... Johnsen CK, Bottiger B, Blom J. Related Articles, Links Abstract Confirmation of electron microscopy results by direct testing of viruses adhered to grids using nucleic acid amplification techniques. J Virol Methods. 2006 Jan 14; [Epub ahead of print]
  9. Mouais, à la rigueur pour les rétrovirus et plus particulièrement le vih mais cette publi : Briggs JA, Grunewald K, Glass B, Forster F, Krausslich HG, Fuller SD. Related Articles, Links Abstract The Mechanism of HIV-1 core assembly: insights from three-dimensional reconstructions of authentic virions. Structure. 2006 Jan;14(1):15-20. PMID: 16407061 [PubMed - in process] donne des virions sans vésicules contaminantes. J'ai hate d'entendre les arguments. Au dela de ça j'aimerais que tout cela ne soit pas focalisé uniquement sur les rétrovirus et les problèmes spécifiques à cette famille, il y a plein de virus qui répondent à ce tant aimé postulat de Koch etc....J'espère pouvoir continuer à dicuter et répondre à tout cela dans 2 semaines.
  10. Lol ce n'est pas parce que je n'ai pas encore répondu que je n'en suis pas capable ! Je n'ai vraiment que peu de temps en ce moment mais je répondrai sur le topic "et si les virus n'existaient pas" et là aussi. Quant à ton hypothèse Wallypat elle est extrêment intéressante. Je te répondrai également mais je te précise déjà qu'il n'y a pas à la base 2 sous populations de T4 TH1 ou TH2 . Cette différentiation des T4 ne se fait qu'après réponse à des stimulus provenant des cellules qui présentent les antigènes après infection.
  11. Positif à l'herpès ? lequel ? CMV ? pas la même chose. Le système immunitaire ne se résume pas aux fameux T4, une pléiade d'autres cellules sont impliquées dans les défenses et jouent un rôle très important. Les séropositifs avec T4 bas ne développent pas le bouton en permanence mais est ce que ce taux reflète les T4 dans les tissus ? Est ce que les T4 sont à la base du contrôle de l'herpès ? Il est effectivement troublant que ceux à faible taux T4 n'attrapent pas tout ce qui passe mais ils développent des maladies comme rétinité à CMV ou candidose ou pneumocystis en plus grande proportion non ? En plus pareil, il n'y a pas que les T4. J'ai également bien précisé : "diminution des défenses ou modifications des signaux cellulaires" bien lire OU car le virus herpès étant dans les neurones je ne sais pas si les T4 peuvent bien contrôler sa multiplication brutale. Les signaux dus aux chemokines etc sont suffisantes à activer la multiplication du virus sans que le système immuniatire ait le temps de répondre.
  12. Ils disent bien que le traitement de choix de la tuberculose c'est le bactrim!!!!!
  13. Je ne vois souvent pas où est la contradiction entre désordre physico chilmique et virus/maladie. Dans le cas d'une poussée d'herpès vous savez que cela peut arriver en cas de choc, stress, fatigue importante etc.... donc signaux de stress dans l'organisme, diminution des défenses ou modifications des signaux cellulaires ce qui peut permettre au virus de passer en phase de réplication d'où le fameux "bouton de fièvre" (j'adore ce tour de passe passe pour ne pas mentionner herpès). On voit bien que les deux sont liés . Après on peut traiter les deux phases mais ça peut être trop tard pour l'une des deux.
  14. Nico111

    La méthode PCR

    Ce n'est pas la méthode qui pèche mais comment tu l'utilise pour détecter quoi avec quelles amorces. Je me répète encore et encore. Tout est question de mise au point. Après PCR (avant RT) j'obtiens un produit avec une taille qui pour supposer qu'un virus ou autre est présent doit correspondre à une taille précise que j'ai déterminée avec mes deux amorces. Ensuit epour confirmer si c'est le virus que je cherche , je séquence le produit PCR et je le compare avec mes séquences de références. Donc non le PCR ne me permet pas d'affirmer que c'est du virus, il faut entre autre séquencer le produit PCR. Comme dans toutes les professions, tu as de tout. Ben au moins pour étuider sa variabilité j'imagine ! Ce n'est pas parce ce que le virus serait endogène ou autre qu'il ne peut pas être détecté ou séquencé. pas super convaincant le "aucune raison d'avoir", évite de supposer. De ce que tu cherches oui mais si ce que tu cherches n'est pas ce que tu crois...... Et alors où est le défaut de la PCR, elle ne fait que détecter ce que tu cherches avec les amorces voulues. C'est un peu comme accuser son ordi de ne pas marcher ou de planter , c'est pourtant tout le temps la faute de l'utilisateur non ? Pige pas trop. ....ou simplement on n'identifie pas ce que l'on croit ! Ce n'est pas parce que c'est endogène que ce n'est pas délètère ou que ce soit un marqueur de maladie ou les conséquences de la maladie. Ensuite le vih peut se propager et il peut être une entité infectieuse exogène à part entière. En core une fois tu utilises une méthode pour savoir si quelque chose est présent ou non, tu l'utilises correctement ou non. Tu peux truquer des images, des vidéos, est ce pour cela que les logiciels utilisés pour le faire sont mauvais ??????? Affirmation gratuite, non fondée, n'engageant que toi et ne concernant donc que toi. Bref un peu inutile quoi. YEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEES tu aurais compris ce que je voulais dire. mouais finalement peut être pas tant que ça........
  15. "puis que le vih les produit " , je ne vois pas trop ce que tu veux dire mais idem qu'avant, si ce pathogène n'existe pas ce test n'a aucune valeur, à la rigueur un des anticorps ciblant une de ses protéines peut croiser avec une protéine cellulaire ou d'un autre pathogène mais pas toutes !!!!!
  16. Que si tu es sure que le pathogène qui provoquerait cette maladie est bien responsable et qu'il est bien caractérisé. Mais de toute façon tu auras toujours une incertitude sur un faible % de gens , il faut donc combiner les tests et les symptomes. Et c'est pareil pour tous les diagnostics viraux, pas seulement pour le vih.
  17. Les tests de diagnostics ne sont jamais fiables à 100% , que ce soit pour HIV ou non et le mot arbitrary ne concerne "que" l'endroit où les courbes se chevauchent. Là forcément on est aux limites de la technique c'est comme ça. Le tout est d'obtenir un test dont le chevauchement faux positif/positif ou faux négatif/négatif soit le plus faible possible. Ca parait peut être fou de se dire qu'on a 5% de faux postif par exemple mais un seul test ne suffit pas et on doit aussi prendre en compte les symptomes etc...... PS: désolé Cheminot mais je ne fais que survoler le forum en ce moment et je n'ai pas le temps de me plonger dans les articles que tu m'as cité sur AZT mais bientôt ça ira mieux !
  18. Nico111

    La méthode PCR

    Dans de TRES rares cas de protéines très conservées. Ce n'est pas que ta méthode PCR en soi n'est pas spécifique, c'est que tu as utilisé des amorces qui amplifient une protéine conservée entre la levure et l'homme (et encore il faut tomber dessus car la séquence n'est pas 100% identique). Les cas de figures sont multiples. Moi par exemple,en général, si j'amplifie des morceaux de virus à 40 degrés pour l'hybridation j'ai du non spécifique. A 45 moins de bandes spé , à 50 plus de non spé , à 55 en général j'obtiens toujours la bande d'ADN que j'attend sans bande contaminante non spé. Donc un petit écart de temp peut beaucoup jouer mais si tu continues à augmenter la temp ta réaction marche toujours et tu n'as plus de non spé donc c'est bon. On travaille sur environ 5 à 10 lignées de céllules différentes plus sur moustiques et rats/souris. Quand on extrait l'ARN global de cellules ou de tissus infectés on a beacoup mais beaucoup plus d'ARN des cellules que d'ARN viruax (au moins 1000 fois plus) mais ça n'em^peche pas d'obtenir uniquement ce qu'on cherche avec les amorces spé et la bonne temp. Contrôle nég non infecté ne donne rien bien sur. Ca te suffit ? Alors t'es mal barré ! faut changer l'amorce. Oui mais là tu supposes que les amorces ne sont pas spé donc c'est de toute façon mort. d'où la présence des contrôles négatifs non infectés, non malades. Si ça sort aussi avec ta PCR alors amorces à la poubelle et si tu suppose que l'amorce au lieu d'être spécifique du pathogène ne fait que cibler des ARN cellulaires en fait alors bien sur ta manip ne veut rien dire, tu ressortiras tout le temps une réaction positive. Voir ci-dessus on a plein de cellules différentes et un extrait d'ARN cellulaire contient des milliers, milions ? d'ARN différents. Il ya beaucoup de cellules différentes lors du test de charge viral ? Bof pas tant que ça. Ce test se fait par PCR quantitative je crois mais je ne sais pas le protocole précis. De toute façon idem il suffit de faire le contrôle avec des échantillons que l'on suppose non infecté. Si c'est aussi positif alors test à la poubelle. Lol à ton avis ????????? en général on travaille par lot de 3 souris, non infectées , infectées etc..... Sur cerveau, rate , foie rein, poumon et autre encore. Et ça a été fait et refait. En PCR basique, je veux par exemple détecter si mon virus est là, je prend deux amorces qui hybrident dans son ARN . Si ça marche je dois obtenir une bande d'ADN après RT PCR d'une taille X par rapport à ce que j esais de son génome . Quand je fais migrer la RT PCR sur un gel d'agarose pour séparer en fonction de la taille les morceaux d4ADN éventuellement amplifiés je dois obtenir une bande à la taille X. Si j'ai autre chose à d'autre taille ça doit être soit une amplification non spé ou alors que je n'ai amplifié qu'une partie de l'ARN que je recheche. A voir avec le contrôle nég. Ton échantillon de contrôle te donne du positif ? alors manip à la poubelle et tu refais. Quant à établir un diagnostic eh bien oui il faut tester avec pleins d'échantillons (au - 500-1000 en général) Non on peux avoir du faux positif, on peut ne jamais se débarasser de bandes cobtaminantes malgré des amorces spé. A toi alors de changer d'amorce ou de conditions de PCR. OUi parce que tes amorces ne sont pas complètement spé par exemple. Si ta PCR peut être positive si un autre pathogène infecte les cellules ç'est un autre problème. Si tes cellules sont absolument saine et que c'est positif alors test à la poubelle. non si tu trouves pareil avec les animaux infectés, et en plus tu ne fais pas qu'une PCR tu fais plein d'autres test sur les protiénes virales , si un effet destructeur des cellules, etc...ça ne repose pas que sur un pauvre test PCR , on ne fais un diagnostic que quand le virus est bien caractérisé. S'il ne l'est pas bien sur....... ce sont tes amorces qui ciblent autre chose. Il faut en changer , vu la taille du génome viral c'est possible. Si tu n'y arrives pas, et que c'est toujours positif alors il faut se poser des questions sur la validité de ton virus. Je suis désolé si je radotte, j'ai l'impression de répéter la même chose. J'ai du mal à te répondre ou me faire comprendre il me semble car là ton raisonnement fait comme si tous les contrôles étaient positifs. Certaines personnes répondent positifs à ce test alors qu'ils ne sont pas infectés mais pour autant c'est une très faible partie parmi les personnes testées et les raisons peuvent être multiples. Si lors de la mise au point de ton test les echantilons non infectés sont négatifs, si tu as des faux positifs ensuite alors c'est que le patient a surement un problème (stress particulier, infection autre , médoc etc...) mais il ne faut pas s'arrêter qu'à un seul test , on doit regarder les symptomes + différents tests. Perso j e n'en ai pas. La PCR est une méthode mais il faut adapter les amorces les conditions etc..... Faut espérer mais comme d'hab le 100% n'existe pas! Pas sur un travail expériemental en général .Qu'il y ait un très faible % de faux positifs dans des échantillons de diagnoqtic ? oui la bio ce n'est pas un science exacte, il faut identifier les sources de faux positifs. Si ta spécificité de diagnostic est par exemple de plus de 95 % = moins de 5% de faux + dans les test (c'est environ le mini accepté je crois) c'est bon non ? Je m'arrête , il est tard , j'ai peur de ne pas avoir su me faire bien comprendre mais bon ne pas hésiter à me faire préciser.
  19. Nico111

    La méthode PCR

    Lol ouais possible dans de très rares cas et encore. C'est marrant parce que globalement ce que tu me dis là c'est la théorie et en pratique je te dirais que non, on ne détecte pas comme ça n'importe quoi , quelques réglages et on élimine le plus souvent les contaminants. Théorie oui mais je peux t'assurer q'un seul malheureux degré peut faire qu'on obtient ce que l'on veut ou rien du tout. Plus tu augmentes la temp. plus tu es spécifique car un mauvais appariement de ton amorce sur las séquence cible va sauter de plus en plus facilement et c'est drastique. La faible quantité de matériel n'est pas un problème (jusqu'à un certain point bien sur) car la PCR fait 2puissanceN copies par pcr avec n=nombre de cycles et la moyenne c'est 30 alors fait un peu le calcul même en partant de 10 copies de ce que tu recherches. Encore une fois le problème c'est les amorces et leur spécificité, la méthode PCR n'est pas en cause. ???? pareil, amorces sont elles spécifiques de ce que tu cherches et as tu fais les bons réglages, en plus le contrôle négatif est là pour savoir si tu es spécifique ou pas. Quant au fait que ce soit une soupe de cellules avec pleins de trucs aucuns problèmes le plus souvent, avec les bonnes amorce c'est ultra spécifique. Nous, on fait des RT pcr de cellules infectées et même de broyat d'organes infectées et dans la bouillie d'ARN extraits on obtient spécifiquement ce qu el'on cherche du matériel génétique du virus, sans bande contaminante. Et alors les techniques de diagnostic sont élaborées en labo d'abord sur des lignées cellulaires infectées puis on passe aux organes d'animaux infectés puis on finit avec des échantillons de fluides ou de tissus de personnes infectées (par exemple) pour vérifier le test , sa spécificité etc......Ici on va dire que HIV infecte principalement les T4 donc on prend le sang d'un patient, on isole les cellules et on extrait l'ARN (ça c'est de la soupe non?) et on pratique la PCR. Tu veux aller voir d'autres cellules ? soit mais quel est l'intérêt si le virus ne les infecte pas ? tu vas me dire et si on détecte un signal non spé dans ces cellules ? eh bien c'est que les amorces ne sont pas si spé que ça mais en quoi ça remet en question le test sur le T4 SI avec des T4 non infectés on n'obtient rien en PCR ????? Bien sur il faut savoir sur quoi on travaille, si le VIH n'existe pas ou ne provoque pas cette pathologie alors ton test ne veut rien dire, il reflète effectivement autre chose (stress oxydatif, apoptose, etc.....) mais la technique de PCR est hors de cause, ce n'est qu'un outil très puissant, à toi de te débrouiller pour avoi rquelque chose de spécifique et de propre, de savoir sur quoi tu travaille et si l'hypothèse de travail est fausse forcément ça fout le test en l'air, pas la technique..
  20. Je n'ai suivi ces problèmes de molécules oxydantes type AZT que de loin mais je vais y jeter un coup d'oeil ce week end avec les liens que tu as mis. Par contre mettre une note dans Nature, c'est plutôt très chaud. Quelle expérience as tu de la publication dans ces types de journaux ? Au labo on a pu sortir un Cell : le boulôt le valait mais on a galéré comme des fous pendant des mois pour le faire accepter car les referees dans ces journaux élitistes n'envisagent souvent le sujet proposé que d'un seul point de vue et pour les faire envisager l'autre c'est pas gagné. En plus sans appui avec une personne influente qui a déjà publié dedans c'est encore plus dur sinon il faut avoir un truc vraiment exellent. Là comme c'est pour s'opposer à ce qui a pu être publié ou discuté ça me parait vraiment très délicat mais pourquoi ne pas tenter, ça ne coute pas grand chose.
  21. Effectivement très bon ! et malheureusement c'est totalement vrai : Tu rigoles mais c'est aussi vrai pour certains chercheurs (j'en connais un d'ailleurs qui ne fait que des conférences et colloques mais pour ce qui est des résultats il collabore beaucoup pour en obtenir "à lui" !!!!)
  22. Ouarf, j'éviterais de généraliser à la recherche publique !!!!!
  23. Mais à toi de faire la part des choses ! Bien sûr sur ce site il y des trucs qui me font hurler de rire (par example Lanka et ses virus qui ne peuvent pas être en couleur, oui désolé j'ai encore craqué mais c'est trop bon), ou qui sont irrationnelles etc....mais d'autres sont tout à fait plausibles (et en particulier le problème VIH-SIDA) et d'autres tout à fait valables. Regarde de plus près, peu de choses sont noires ou blanches. L'effet placébo est indéniable, la psychologie face à la maladie est déterminante, les molécules naturelles ont encore beaucoup à nous apprendre etc.....On te donneras de arguments, valables ou non mais tu te rends bien compte que pour critiquer ces arguments il te faut un certain recul, une expérience (pratique, scientifique, ou les deux). Il y a des sujets où je suis incapable de trancher à l'heure actuelle et pourtant j'ai une formation scientifique plutôt importante (mais il me manque encore plusieurs années d'expérience). Il y a la théorie et les faits en pratique, à toi d'esayer de concilier les deux.
  24. Hum......je ne pense pas que votre discussion va déboucher sur grand chose..... Que veux tu Dongiovanni, le milieu médical, pharmaceutique n'est au final que comme les autres milieux (financiers, politiques etc....) : ils y a des bons , des mauvais , des planqués, des révolutionnaires, des usurpateurs et ainsi de suite. Toi seul déterminera ce que tu seras comme médecin en fonction de ce que tu as appris, de ce que tu veux faire plus tard (gagner un max de fric, ne pas faire de garde , aller en campagne, faire urgentiste) , de ton ouverure d'esprit , de ta curiosité.....C'est déjà bien, tu es déjà sur ce forum et tu le lis, après bien sur à toi de te faire une opinion. Franchement, ne le prend pas comme de la condescendance mais tu as besoin d'avancer un peu plus dans les études pour avoir un recul un peu plus important (et malheureusement souvent ça ne suffit pas vraiment) et pouvoir faire la comparaision entre théorie et pratique. Tu oublies un détail qui fait pourtant toute la différence : tu es étudiant donc au pire les profs te riront au nez si tu remets en question par exemple les cas de SIDA sont dus au VIH ou est ce que le VIH existe. Ca c'est parce que tu n'es encore qu'un "bleu" et qu'il faut bien que jeunesse se passe, come ils diront tu es encore ignorant. Mais quand tu auras ton diplome et que tu auras un patient en face, crois moi ce ne sera pas la même chose.
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